基因敲除技术是人为地使靶基因的序列发生碱基对的增添、缺失或替换，引起的靶基因结构的改变，以达到定点修饰改造特定基因的目的。基因敲除技术是反向遗传学研究中最重要的技术工具。基因敲除斑马鱼广泛应用于遗传学、发育生物学、细胞生物学、医学、环境毒理学、水产育种学等研究领域。

斑马鱼基因敲除技术服务合同-活性sgRNA筛选

技术路线

1 分析目标基因的基因组结构

2 设计并体外合成sgRNA

3 体外合成Cas9 mRNA

4 鉴定所制备的sgRNA是否具有在斑马鱼胚胎内引导Cas9切割目标基因的活性

斑马鱼基因敲除技术服务合同-敲除突变体的建立（F1代）

技术路线

1 将有活性的sgRNA和Cas9 mRNA共同注射斑马鱼受精卵

2 将经注射的受精卵饲养至30-45日龄时，通过对尾鳍的基因组鉴定确认Founder体细胞携带目标基因突变的等位基因

3 获得Founder的F1代

4 至30-45日龄时，通过剪尾鳍的方法进行基因型鉴定，筛选F1个体，获得基因敲除突变体

斑马鱼基因敲入技术服务合同—活性sgRNA筛选

技术服务流程

1 分析KI位置附近的DNA序列特征

2 设计单链供体（donor）

3 设计并体外合成sgRNA

4 体外合成Cas9 mRNA

5 鉴定所制备的sgRNA是否具有在斑马鱼胚胎内引导Cas9切割目标基因的活性

6 体外合成单链供体

斑马鱼基因敲入技术服务合同—基因敲入突变体建立（F1代）

技术服务流程

1将单链供体和有活性的sgRNA以及Cas9 mRNA共同注射到斑马鱼受精卵，建立基因敲入（KI）初建者（Founder）

2 提取10枚初建者的基因组DNA，通过扩增目标序列，鉴定确认Founder体细胞携带敲入的目标基因（KI）

3 获得Founder的F1代

4 至60日龄时，通过剪尾鳍的方法进行基因型鉴定，筛选F1个体，获得基因敲入突变体